组织冰冻切片ROS观察活性氧实验报告-上海郑核

一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称 厂家 型号

冰冻切片机 Thermo Cryotome E

载玻片 Servicebio

盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 10212432C

脱色摇床 Servicebio TSY-B

涡旋混合器 Servicebio MX-F

掌上离心机 Servicebio D1008E

移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573

组化笔 Gene tech GT1001

冰箱 青岛海尔股份有限公司 BCD-192TGN

正置荧光显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse C1

成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

2、主要实验试剂

试剂 厂家 货号 稀释比

OCT包埋剂 Sakura 4583

PBS缓冲液 Servicebio G0002

ROS染液 Servicebio G1045

DAPI Servicebio G1012

抗荧光淬灭封片剂 Servicebio G1401

二、冰冻切片免疫荧光实验步骤

1、染色：冰冻切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加ROS染液，避光恒温箱37°孵育30min。

2、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

3、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

4、镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光）

三、冰冻切片免疫荧光实验结果判读

DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光

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